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如何计算DNA片段的长度
更新时间:2021-05-18 点击次数:1959

那么下面上海金鹏分析仪器有限公司为大家简单介绍一下关于如何计算DNA片段的长度:

在测量比细胞小得多的DNA片段的长度时,微生物学家需要技巧,而方便的方法是凝胶电泳仪。此方法依赖于DNA片段带电的事实,它是更昂贵的方法(例如X射线晶体学)的替代方法,该方法负责发现DNA的双螺旋结构。

凝胶电泳的工作原理

由于DNA分子带电,因此会受到电流的影响。当您将它们放在中性凝胶中并在凝胶上通电时,分子会向正极(阳极)迁移。因为不同大小的DNA分子带有相同的电荷,所以较小的分子会更快地传播,因此此过程将分子分成多个条带,可以与已知大小的样本进行比较。

电泳基本程序

该凝胶通常由琼脂糖制成,琼脂糖是一种多糖,在缓冲溶液中加热后会形成半固体,微孔凝胶。在一端,凝胶形成微小的凹痕,称为孔,研究人员将研究中的DNA样品与已知长度的参考样品(称为DNA阶梯)放置在一起。阶梯片段的长度已经通过另一种方法例如X射线晶体学来预定。

当凝胶浸入导电溶液中并施加电压时,碎片开始迁移通过凝胶-先是较小的碎片,然后是较大的较慢的碎片。它们终根据大小形成类似频谱的波段。

一旦发生这种情况,研究人员将关闭电源,用DVA结合染料注入凝胶,并在紫外线下检查样本。使用梯子作为参考,研究人员可以确定可见带中每个片段的大小。只有条带可见–单个DNA片段太小而看不见。

确定未知片段的长度

并非样品中的每个谱带都有可能与阶梯上的谱带配对,因此,为了确定这些未知片段的大小,科学家通常会绘制一个图。x轴上的是梯子中每个频段的行进距离(以毫米为单位),而y轴上的是每个频段的大小。当这些点通过曲线连接时,在测量该带行进的距离(以毫米为单位)后,可以从曲线中推断出任何带的大小。

 

以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于如何计算DNA片段的长度。

 

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