核酸蛋白分离层析仪的纯化方法
沉淀法
(1)盐析沉淀法
这是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度不同,而达到彼此分离的方法,是蛋白质和酶提纯工艺中较早采用,且至今仍广泛应用的方法。
蛋白质易溶于水,因为其分子的-COOH-NH2和-OH都是亲水基团,这些基团与极性水分子相互作用形成水化层,包围于蛋白质分子周围形成1~100nm大小的亲水胶体,从而削弱了蛋白质分子之间的作用力。
当大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO42-和NH4+)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之"失水",于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。
(2)等电点沉淀法
是利用蛋白质在等电点时溶解度较低,而各种蛋白质具有不同的等电点来分离蛋白质的方法,称为等电点沉淀法。
由于等电点时蛋白质的净电荷为零,失去了水化膜和分子间的相斥作用,疏水性氨基酸残基暴露,蛋白质分子相互靠拢聚集,易形成沉淀析出。
(3)有机溶剂沉淀法
此法原理是:与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇等)能使某些蛋白质在水中的溶解度显著降低。在室温下,有机溶剂不仅能够引起蛋白质的沉淀,而且伴随变性。
因此,通常要将有机溶剂冷却,然后在不断的搅拌下加入有机溶剂,以防止局部浓度过高,蛋白质变性问题就可以很大程度上得到解决。
用此法析出的沉淀一般比盐析法易过滤或离心沉降,分离后的蛋白质沉淀应立即用水或者缓冲液溶解,以达到降低有机溶剂的浓度的目的。此法在血液制品的制备过程中较多使用。